Trình duyệt của bạn đã tắt chức năng hỗ trợ JavaScript.
Website chỉ làm việc khi bạn bật nó trở lại.
Để tham khảo cách bật JavaScript, hãy click chuột
vào đây
!
Khoa Khoa học và Công nghệ Vật liệu
Khoa Khoa học và Công nghệ Vật liệu, Trường đại học Khoa Học Tự Nhiên
TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP.HCM
KHOA
KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ VẬT LIỆU
Trang chủ
Thông tin về khoa
Lịch sử phát triển
Sứ mạng & Tầm nhìn
Cơ cấu tổ chức
Thành tựu
Các đơn vị
Bộ môn
Vật liệu Nano & Màng mỏng
Giới thiệu
Nhân sự
Đào tạo
Trang thiết bị
Nghiên cứu khoa học
Hướng nghiên cứu
Đề tài - Dự án
Công bố khoa học
Các hoạt động khác
Vật liệu Polyme và Composit
Giới thiệu
Nhân sự
Đào tạo
Trang thiết bị
Nghiên cứu khoa học
Hướng nghiên cứu
Đề tài - Dự án
Công bố khoa học
Các hoạt động khác
Vật liệu Từ & Y sinh
Giới thiệu
Nhân sự
Đào tạo
Trang thiết bị
Nghiên cứu khoa học
Hướng nghiên cứu
Đề tài - Dự án
Công bố khoa học
Các hoạt động khác
Phòng thí nghiệm
PTN Cơ sở KHVL
Giới thiệu
Nhân sự
Trang thiết bị
Nghiên cứu khoa học
Các hoạt động khác
PTN Vật liệu da chức năng
Giới thiệu
Nhân sự
Trang thiết bị
Nghiên cứu khoa học
Các hoạt động khác
Trung tâm
Các tổ chức khác
Chi bộ
Tin tức
Hoạt động
Công đoàn Khoa
Tin tức
Hoạt động
Chi đoàn cán bộ trẻ
Tin tức
Hoạt động
Đào tạo - NCKH
Đào tạo
Đào tạo đại học
Chương trình đào tạo
Chuẩn đầu ra
Thông báo
Đào tạo sau đại học
Chương trình Thạc sĩ
Chương trình ThS KHVL
Chương trình ThS KHVL phối hợp
Chương trình Tiến sĩ
Nghiên cứu khoa học
Các nhóm / hướng nghiên NC
Trang thiết bị
Đề tài - Dự án
Công bố khoa học
Quốc tế
Trong nước
Sách
Chuyển giao công nghệ
Hợp tác
Trong nước
Doanh nghiệp
Các tổ chức khác
Quốc tế
Doanh nghiệp
Các tổ chức khác
Tuyển sinh
Đại học
Sau đại học
Tuyển dụng
Thông báo
Học bổng
Cơ hội việc làm
Cựu sinh viên
Sự kiện
English
Đăng nhập
Chúng tôi trên mạng xã hội
Chúng tôi trên mạng xã hội
Thông tin liên hệ
Thông tin liên hệ
02838350831
mst.hcmus@gmail.com
Trang chủ
Đào tạo - NCKH
Đào tạo
Đào tạo đại học
Thông báo
Lịch thực tập Sinh chuyên ngành Y sinh -K16YS
Thứ năm - 21/03/2019 15:18
THỰC TẬP SINH - Mã môn học: MSC10309
CHUYÊN NGÀNH VẬT LIỆU Y SINH
KHOA KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VẬT LIỆU
Tháng 4/2019
Số buổi thực tập: 08 buổi (sáng từ 7h30 đến 11h00, chiều từ 12h30 đến 16h00) và 01 buổi ôn tập, báo cáo kết quả
Nơi thực tập:
PTN. Công nghệ gene và Vi sinh
(Phòng A302, cơ sở Thủ Đức – Dĩ An)
Tổng số sinh viên: 18 sinh viên,
2 sinh viên/nhóm
, 9 nhóm
Thời gian thực tập:
03, 04, 10, 11/04 (thứ tư, thứ năm)
- Cán bộ giảng dạy:
+ Trưởng thực tập/Giảng viên: ThS. Lê Mai Hương Xuân (PTN. Công nghệ Sinh học phân tử) + Chuẩn bị thực tập/Trợ giảng:
CN. Lê Trung Nghĩa (BM. CNSH Phân tử và Môi trường, Khoa Sinh học - CNSH)
CN. Lê Khả Hân (BM. CNSH Phân tử và Môi trường, Khoa Sinh học - CNSH)
* Đánh giá môn học:
- Trình bày kết quả và biện luận (đánh giá theo nhóm): 30%
- Kiến thức về môn học (đánh giá cá nhân): 50%
- Thi thực hành (đánh giá cá nhân): 20%
* Lưu ý
:
Trước khi đến lớp, đọc tài liệu và tìm hiểu nguyên tắc phương
pháp, ý nghĩa của từng bước thí nghiệm, vai trò và độ độc hại
của các hóa chất
Đến lớp đúng thời gian quy định
Tham gia đầy đủ các buổi thực tập
Mặc áo blouse khi thực tập
Buổi
Nội dung thực tập
Chi tiết
1 và 2
Ngày
03/4/2019
Sáng
Chiều
Bài số 1: Tách chiết DNA
Giảng cơ sở của phương pháp tách chiết DNA, bao gồm DNA tổng số và DNA
plasmid
Sinh viên thực hành tách DNA tổng số, DNA plasmid của
Escherichia coli
.
Tiếp tục tách chiết DNA tổng số và DNA plasmid
1. Tách chiết DNA tổng số
Nhận 01 ống 5 ml môi trường LB nuôi cấy tế bào
E. coli
Chuyển 1,5 ml dịch vi khuẩn vào eppendorf (epp). Li tâm thu sinh khối ở 10000 vòng/phút, 5 phút ở nhiệt độ phòng.
Bỏ dịch bên trên. Thu tủa sinh khối tế bào.
Lặp lại từ bước 2 và bước 3 cho đến khi thu hết dịch vi khuẩn trong ống nghiệm
Cho vào epp chứa sinh khối 230 μl dung dịch ly giải (Triton X100 2%, SDS 1%, NaCl 0,1 M, EDTA 1 mM pH 8.0, Tris-HCl 10 mM pH 8.0. Bổ sung thêm 0,04 g hạt glass beads, 200 μl hỗn hợp phenol: chloroform (1:1)). Vortex kĩ trong 3 phút. Sau đó, ly tâm 13000 vòng/phút, 3 phút, thu dịch nổi vào epp mới.
Bổ sung 5 µl RNAse (nồng độ 1 mg/ml). Ủ 37ºC trong 1 giờ.
Bổ sung 250 ul chloroform, đảo đều, li tâm 13000 vòng/phút, 10 phút, nhiệt độ phòng. Thu dịch nổi vào epp mới. Ước tính thể tích thu được.
Thêm vào epp trên 2,5V ethanol tuyệt đối lạnh, ủ ở -20
o
C, 30 phút.
Li tâm 13000 vòng/phút, 20 phút, 4
o
C. Hút bỏ dịch nổi, thu tủa.
Rửa tủa trên với 500 ul ethanol 70% lạnh, li tâm 13000 vòng/phút, 10 phút, 4
o
C. Hút bỏ dịch nổi, thu tủa. Phơi khô.
Hòa tủa vào 20 ul H
2
O. Giữ ở -20
o
C.
2.
Tách chiết DNA plasmid bằng phương pháp SDS – kiềm
Nhận 01 ống 5 ml môi trường LB nuôi cấy tế bào
E. coli
Chuyển 1,5 ml dịch vi khuẩn vào eppendorf (epp). Li tâm thu sinh khối ở 10000 vòng/phút, 5 phút ở nhiệt độ phòng.
Bỏ dịch bên trên. Thu tủa sinh khối tế bào.
Lặp lại từ bước 2 và bước 3 cho đến khi thu hết dịch vi khuẩn trong ống nghiệm.
Cho vào epp chứa sinh khối 100 ul dung dịch I, vortex đến khi sinh khối huyền phù đều.
Thêm 200 ul dung dịch II, đảo nhẹ epp 6-8 lần. Sau đó thêm tiếp 150 ul dung dịch III, đảo 6-8 lần.
Li tâm 13000 vòng/phút trong 10 phút, nhiệt độ phòng. Thu dịch nổi vào một epp mới.
Bổ sung 5 µl RNAse (nồng độ 1 mg/ml). Ủ 37ºC trong 1 giờ.
Cho vào mỗi epp 600 µl hỗn hợp phenol : chloroform (tỉ lệ 1:1), đảo 6-8 lần, li tâm 13000 vòng/phút, 5 phút, nhiệt độ
phòng. Thu dịch nổi vào epp khác.
Bổ sung 250 ul chloroform, đảo đều, li tâm 13000 vòng/phút, 10 phút, nhiệt độ phòng. Thu dịch nổi vào epp mới. Ước tính thể tích thu được.
Thêm vào epp trên 2,5V ethanol tuyệt đối lạnh, ủ ở -20
o
C, 30 phút.
Li tâm 13000 vòng/phút, 20 phút, 4
o
C. Hút bỏ dịch nổi, thu tủa.
Rửa tủa trên với 500 ul ethanol 70% lạnh, li tâm 13000 vòng/phút, 10 phút, 4
o
C. Hút bỏ dịch nổi, thu tủa. Phơi khô.
Hòa tủa vào 20 ul H
2
O. Giữ ở -20
o
C.
01 tiểu nhóm nhận 02 ống nghiệm dung dịch nuôi cấy E. coli 03 tiểu nhóm nhận: Một bộ dung dịch, hóa chất tách chiết
Buổi
Nội dung thực tập
Chi tiết
3 và 4
Ngày
04/4/2019
Sáng
Chiều
Bài số 2: Phân tích DNA
Giảng bài: phân tích DNA bằng phương pháp đo mật độ quang, điện di gel agarose
Bài số 3: Kỹ thuật PCR
Giảng bài Lý thuyết kỹ thuật PCR
Sinh viên thực hành đặt phản ứng PCR.
Sinh viên thực hành điện di DNA trên gel agarose
Phân tích DNA bộ gene bằng phương pháp đo mật độ quang
Mỗi nhóm pha loãng 5 lần dung dịch DNA thu được ở
bài 1.
CBGD sẽ đo mật độ quang. Sau đó, mỗi nhóm
nhận và phân tích kết quả đo mật độ quang.
Thực hiện nhân bản gene mục tiêu bằng phương pháp PCR
Mỗi tiểu nhóm tiến hành hút lần lượt các thành phần phản ứng PCR vào epp 0,2 ml sao cho đạt nồng độ sau:
DNA tổng số 100 ng hoặc DNA plasmid (
từ
bài 1
)
Buffer (10X) 1X dNTP Mix, 2 mM each 0,2 mM
MgCl
2
(25 mM) 2 mM
Mồi xuôi (2,5 mM) 0,2 mM
Mồi ngược (2,5 mM) 0,2 mM
Taq
polymerase (1 u/μl) 0,5 u
Bổ sung dH
2
O đến 25 ul
Đặt epp có chứa hỗn hợp phản ứng PCR vào máy PCR.
Mỗi tiểu nhóm nhận 01 bộ hóa chất cho phản ứng PCR CBGD sẽ bổ sung enzyme cho các nhóm.
3.
Phân tích DNA bằng điện di trên gel agarose:
Mỗi nhóm tiến hành điện di mẫu DNA bộ gene thu được ở
bài 1
và sản phẩm PCR thu được ở
bài 3
Buổi
Nội dung thực tập
Chi tiết
5 và 6
Ngày
10/4/2019
Sáng
Chiều
Bài số 4: Biểu hiện
protein tái tổ hợp
Giảng về lý thuyết biểu hiện protein tái tổ hợp
Bài số 5: Phương pháp thu nhận protein
Giới thiệu
một số phương pháp thu nhận protein
Bài số 6: Phân tích
protein
1.
Giảng bài: Phân tích protein bằng điện di
SDS-PAGE
Sinh viên tham quan Phòng thí nghiệm sản xuất protein tái tổ hợp (thuộc Phòng thí nghiệm Nghiên cứu Ung thư), xem các hệ thống sản xuất protein, các thiết bị thu nhận và tinh chế protein.
3 nhóm nhận 01 bộ gồm các mẫu sau đây:
500 ul dịch phá tế bào
E. coli
đã được cảm ứng biểu hiện protein mục tiêu (1)
500 ul dịch tinh chế protein mục tiêu cảm ứng biểu hiện từ
E. coli
(4)
500 ul dịch lên men
Pichia pastoris
được cảm ứng biểu hiện protein mục tiêu (5)
500 ul dịch tinh chế protein mục tiêu cảm ứng biểu hiện từ
P. pastoris
(6)
1. Thực hiện thu nhận riêng các phân đoạn protein tổng, tan, tủa từ dịch phá tế bào
E. coli
:
Hút 50 ul dịch (1) sang 1 epp khác để sử dụng cho bài sau.
Ly tâm phần còn lại của dịch (1) với tốc độ 13000 vòng/phút trong 3 phút.
Hút phần dịch nổi sang 1 epp khác (2)
Hòa tan phần tủa bằng 450 ul H
2
O (3)
2.
Thực hiện điện di SDS-PAGE
-
3 nhóm điện di 6 mẫu protein gồm các mẫu được ký hiệu (1), (2), (3), (4), (5),
(6) ở trên.
2.
Thực hành điện di
SDS-PAGE
Hút 50 µl mẫu protein vào epp mới. Bổ sung 10 µl dung dịch xử lý mẫu 6X (sample buffer 6X). Trộn đều. Đun ở 100ºC trong 15 phút. Ngâm nước đá trong 5 phút.
Nạp 10 µl mẫu đã xử lý vào giếng.
Điện di với dòng điện có cường độ ổn định 2 mA/giếng, hiệu điện thế 110 V trong 30 phút, sau đó, chỉnh hiệu điện thế 220 V đến khi vạch xanh ra khỏi gel.
Chuyển gel vào hộp thuốc nhuộm coomassie brilliant blue. Lắc nhẹ trong 30 phút.
Chuyển gel vào hộp chứa dung dịch giải nhuộm. Lắc nhẹ đến khi nền gel hết màu xanh.
03 tiểu nhóm sử dụng chung 1 miếng gel
CBGD chuẩn bị gel SDS-PAGE và gỡ gel sau khi điện di xong.
Buổi
Nội dung thực tập
Chi tiết
7 và 8
Ngày
11/4/2019
Sáng
Chiều
Bài 6: Phân tích protein
(tiếp theo)
Giảng bài: Một số phương pháp định
lượng protein
Thực hành xác định nồng độ protein bằng phương pháp Bradford
Thực hành xác định tỷ lệ % protein mục tiêu
Tiếp tục thực hành các kỹ thuật phân tích protein
1.
-
-
-
-
2.
-
-
-
-
-
-
Xác định nồng độ protein tổng bằng phương pháp Bradford
Mỗi 3 nhóm đo nồng độ protein 4 mẫu: (2), (4), (5), (6) ở trên.
Hút 300 µl mẫu vào ống nghiệm. Bổ sung 1200 µl thuốc thử Bradford. Trộn đều. Để yên 10 phút.
Đo mật độ quang ở bước sóng 595 nm.
Dựa trên đường chuẩn và giá trị OD
595
đo được, tính toán nồng độ protein trong mẫu. Kết quả được chấp nhận khi giá trị OD
595
nằm trong giới hạn tuyến tính của đường chuẩn.
Xác định tỷ lệ % protein mục tiêu bằng phần mềm GelAnalyzer
Gel điện di SDS-PAGE được scan để lưu trữ dưới dạng file ảnh.
Mở phần mềm, chọn New analysis, chọn file ảnh muốn phân tích.
Chọn Add new lane tại mục Lanes mode để chọn giếng điện di cần phân tích. Có thể sử dụng chức năng Modify lanes để chỉnh sửa lại khu vực chọn.
Chuyển qua thẻ Bands mode, chọn Add new band để bắt đầu xác định từng vạch protein. Sau khi đã chọn đủ các vạch protein có trong giếng, chuyển qua bước tiếp theo.
Vào thẻ Background subtract mode, chọn Rolling ball. Lúc này một bảng nhỏ hiện ra, nhập giá trị cho Ball radius.
Sau khi thực hiện bước Rolling ball, ô Analysis info sẽ hiện ra thông tin về diện tích của các vạch trên giếng. Tỷ lệ của protein mục tiêu trong hỗn hợp là tỷ lệ diện tích của protein mục tiêu trên tổng diện tích.
CBGD scan gel điện di của các nhóm
03 tiểu nhóm chuẩn bị 01 laptop
Tổng số điểm của bài viết là: 0 trong 0 đánh giá
Click để đánh giá bài viết
Tweet
Những tin mới hơn
DSSV bị Buộc thôi học và Cảnh cáo học vụ HK2/18-19
(02/04/2019)
Thông báo v/v SV đánh giá môn học - giảng viên HK2/2018-2019
(03/05/2019)
Danh sách sinh viên cấm thi cuối kỳ môn KT phân tích vật liệu polymer
(27/05/2019)
Thông báo phúc khảo HK2/2018-2019 (chính quy)
(16/07/2019)
Danh sách học phần mở trong học kỳ 1 năm học 2019-2020
(05/08/2019)
Thời khóa biểu học kỳ 1 năm học 2019-2020 Khóa 2016, 2017(cập nhật phòng học)
(16/08/2019)
Hủy học phần Hỗn hợp polymer-K16PO
(29/08/2019)
Lịch học môn Hỗn hợp polymer cho K15 trở về trước
(05/09/2019)
V/v Đến lớp học môn Hóa học các nguyên tố chuyển tiếp và không chuyển tiếp hk1/19-20
(05/09/2019)
Mở lớp học lại môn Công nghệ tổng hợp tái chế polymer K16 trở về trước-Lịch học chi tiết
(06/09/2019)
Những tin cũ hơn
Thay đổi phòng học 1 số môn K16-Polymer
(01/03/2019)
Huỷ lớp tiếng Anh môn Tính chất cơ lý polymer-K16Po
(28/02/2019)
V/v Đăng ký học phần của sinh viên K2015 còn nợ Anh văn
(26/02/2019)
K16-Polymer: Thời gian bắt đầu học môn Cao su hoá học và công nghệ
(20/02/2019)
Thời khoá biểu học phần Kỹ thuật phân tích vật liệu polymer-KVL440
(18/02/2019)
Thông báo phúc khảo HK1/18-19 (Đại học và Cao đẳng)
(30/01/2019)
Thời khóa biểu học kỳ 2 năm học 2018-2019 (K2017,K2016, K2015)
(30/01/2019)
Kết quả đăng ký chuyên ngành Khóa 2016
(16/01/2019)
Danh sách học phần mở trong học kỳ 2/18-19 (K17,16,15)
(14/01/2019)
Đăng ký chuyên ngành Khóa 2016
(28/12/2018)
Đào tạo - NCKH
Đào tạo
Đào tạo đại học
Chương trình đào tạo
Chuẩn đầu ra
Thông báo
Đào tạo sau đại học
Chương trình Thạc sĩ
Chương trình ThS KHVL
Chương trình ThS KHVL phối hợp
Chương trình Tiến sĩ
Nghiên cứu khoa học
Các nhóm / hướng nghiên NC
Trang thiết bị
Đề tài - Dự án
Công bố khoa học
Quốc tế
Trong nước
Sách
Chuyển giao công nghệ
Trang chủ
Video
Thống kê
Thành viên
Liên hệ
Bạn đã không sử dụng Site,
Bấm vào đây để duy trì trạng thái đăng nhập
. Thời gian chờ:
60
giây
Đăng nhập
Đăng ký
Hãy đăng nhập thành viên để trải nghiệm đầy đủ các tiện ích trên site
Nhập mã xác minh từ ứng dụng Google Authenticator
Thử cách khác
Nhập một trong các mã dự phòng bạn đã nhận được.
Thử cách khác
Đăng nhập
Quên mật khẩu?
Để đăng ký thành viên, bạn cần khai báo tất cả các ô trống dưới đây
Giới tính
N/A
Nam
Nữ
Bạn thích môn thể thao nào nhất
Món ăn mà bạn yêu thích
Thần tượng điện ảnh của bạn
Bạn thích nhạc sỹ nào nhất
Quê ngoại của bạn ở đâu
Tên cuốn sách "gối đầu giường"
Ngày lễ mà bạn luôn mong đợi
Tôi đồng ý với
Quy định đăng ký thành viên
Đã đăng ký nhưng không nhận được link kích hoạt?